探討澳洲胎牛血清的蛋白提取技術(shù)
發(fā)布日期:2020-04-08 瀏覽次數(shù):642
澳洲胎牛血清取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分少,所以胎牛血清是品質(zhì)z高的。 澳洲胎牛血清的儲存條件:
血清一般儲存于-20℃,同時應(yīng)避免反復(fù)凍融。購買大包裝的血清后,首先要滅活處理,然后分裝成小包裝,儲存于-20℃,使用前融化。融化時現(xiàn)置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放,應(yīng)盡快使用。
澳洲胎牛血清的蛋白提取工藝:
1.分離血漿、取新鮮牛血放入制冷功能離心機中,加入血量的10%的濃度為3.8%的枸櫞酸鈉、離心溫度2°C以下,分離血漿、血球、收集血漿、血球另用。
2.將血漿放入夾層反應(yīng)罐內(nèi)、夾層內(nèi)加熱水,邊加熱水邊加入牛血清容積的0.2-0.3%的辛酸鈉、緩慢攪拌、溫度在55-65°C,溶解后調(diào)PH值、加入濃度為1摩爾的鹽酸、將PH調(diào)至4.6.5然后加入血清總量的5.5%的濃度為95%的乙醇、過濾濾渣去掉。
3.脫鹽和濃縮、將濾液用20000分子量以下的超濾器洗脫鹽類及其它小分子雜志同時進行濃縮。
凍干、將濃縮液按凍干即將濃縮液迅速冷凍至-40°C、持續(xù)1小時左右,升到-25°C、持續(xù)10-20小時再緩慢升溫到0°C再持續(xù)1-4小時升溫保存溫度20°C為成品。